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一种通过CRISPR/Cas9系统快速获得大片段缺失的细胞系基因敲除方法

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专利号 2017106334673 专利名称 一种通过CRISPR/Cas9系统快速获得大片段缺失的细胞系基因敲除方法
专利类型 发明专利 国际分类 C12N15/85(2006.01),C12N15/65(2006.01),C12N15/90(2006.01)
申请人 新乡医学院 申请地址 453003河南省新乡市金穗大道东段
发明人 卢燎勋,张黎琛,梁银明,黄蓉,晁天柱,郑前前,罗静,谷妍蓉,袁鹏 申请日期 2017-07-28
下证状态 已下证 更新时间 2026-09-17 17:22:59
专利摘要 本发明涉及一种通过CRISPR/Cas9系统快速获得大片段缺失的细胞系基因敲除方法,属于基因工程和遗传修饰领域。本发明改造pX458载体,使其带有DsRed2和ECFP,然后针对目标基因设计多个特异性的sgRNA位点,将其连接至改造载体中,转染细胞系后利用流式细胞仪对细胞群进行分选,可以非常快速获得基因组被编辑的单细胞,然后用PCR扩增单细胞DNA序列,通过凝胶电泳即可以从中挑选出具有大片段缺失的单细胞。本发明通过将CRISPR/Cas9系统、流式细胞仪单细胞分选和表达载体上的荧光蛋白筛选三者结合起来,可以在短时间内获得具有大片段缺失的阳性单克隆,极大地提高细胞系基因敲除工作效率。  

交易流程

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买卖双方需提供 平台提供 转让后买方可获得
企业 个人 专利代理委托书
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卖方 企业营业执照
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身份证
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