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一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统

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专利号 2018100548442 专利名称 一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统
专利类型 发明专利 国际分类 C12N15/90(2006.01),C12N9/22(2006.01)
申请人 陕西师范大学 申请地址 710062陕西省西安市长安南路199号
发明人 夏海滨 申请日期 2018-01-19
下证状态 未知 更新时间 2025-01-10 08:34:00
专利摘要 本发明公开了一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统,由打靶载体和打靶供体两部分组成,其中,打靶供体携带需要引入的外源DNA片段,该外源DNA片段包括T2A小肽、荧光素酶基因cDNA序列、eGFP表达框、Neomycin基因序列和上、下游同源臂序列;打靶载体含有核酸酶Cas9表达框和靶向hDGKθ的引导链sgRNA表达框。该报告系统的建立方法,包括筛选靶向hDGKθ基因3′非编码区的sgRNA,构建携带Cas9、sgRNA表达元件的真核表达载体作为打靶载体,构建携带荧光素酶基因cDNA序列以及用于定点整合的上、下游同源臂和筛选基因的打靶供体,将这两种载体共同转染目标细胞,利用抗性基因筛选,即可完成靶向hDGKθ的荧光素酶报告系统在目标细胞中的建立。

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